達學堂·答疑討論
Q：我在高壓鍋檸檬酸修復時用到了6分鐘，時間長了嗎？
答：要看具體檢測切片。6分鐘的計時是怎么計？一般情況下，如果高壓鍋噴氣后才計時，6分鐘修復后，組織切片浮片明顯，細胞核很難著染蘇木素，即核染色質被破壞。
Q：如果手工免疫組化今天修復完來不及做了，那可以冷卻后放到蒸餾水或PBS中第二天再做么？
答：不建議，會增加脫片的機率。
Q：ALk(D5F3)陰性對照出現非特異性顯色，是什么原因？
答：多數是組織處理出現問題，或肺泡腔大量滲出物也可出現非特異染色，一般情況下ALk(D5F3)陰性對照與ALk(D5F3)同時出現非特異染色。
Q：陽性對照可以選我們曾經做過的陽性組織么？
答：可以。
Q：如果一批片子有二十種試劑，應該怎么選擇對照？
答：可參慮多組織蠟塊的對照組織（即將多種組織包在同一蠟塊上），這些組織應涵蓋你單位所使用的抗體能表達的組織，但對于某些治療用藥的抗體（如Her2 應包含3+、2+、1+及0四種染色強度的對照組織）。
Q：我們是基層單位，目前還是手工免疫組化，請教手工免疫組化的容易出錯的地方以及應對方法？
答：手工免疫組化容易出現的問題：（1）抗原修復質量容易出現波動，尤其是沒有建立規范的作業指導書的單位，以及崗位輪換比較頻繁的單位，每位老師都按照自己的想法和習慣行事。因此科室必須建立每個操作環節的作業指導書，并進行全員培訓、考核；每位操作者均應按要求進行操作；（2）加樣環節容易出現問題，如滴加的試劑不足，導致干片現象；加樣前組織上殘留的PBS過多稀釋了抗體，導致染色信號減弱；切片未放平，抗體傾斜到一邊，導致陰陽染色；加樣吸頭劃傷組織；抗體孵育時間掌控不好；（3）蘇木素復染過深或過淺；（4）操作不熟練情況下容易遺漏某操作步驟，導致染色失敗；（5）沒有外對照，染色結果存在疑問。
Q：對于一些要用低PH修復的抗體怎么調方案？是否要換其他廠家的抗體。
答：不太理解這位老師提問的意思，每種新使用的抗體均應進行驗證（包括適合的修復液、修復方式及時間、抗體稀釋度等）。當然試劑說明書會有推薦的修復液及修復方案，可參考。不一定要更換廠家。
