達學堂·答疑討論
Q:解凍,我們用的膠水,怎么解凍呢?
答:沒用過。可用實驗組織塊嘗試跟OCT包埋劑的解凍方式進行解凍,了解組織處理質量。
Q:背景著色屬于非特異性著色嗎?
答:是的。非特異著色是指在非預期的著色部位出現了染色,引起非特異染色的常見原因有:(1)組織固定不及時,抗原彌散,導致定位不清;(2)抗體濃度過濃,不該著染的成分出現染色:(3)抗體孵育時間過長;或抗原修復時間過長,導致非特異染色;(4)抗體質量欠佳,特異性差,導致所有組織均著染;(5)PBS漂洗時間過短。
Q:pAX5做了怎樣的處理?
答:講義上講的:延長了抗原修復時間及抗體孵育時間。
Q:請教一下做出來的片子出現完全未染上色的情況 你們是怎么處理的?
答:首先查找白片發生的原因,在確保組織處理質量的前提下,著重檢查檢測過程是否存在不足,如果是手工染色:檢查有沒遺漏操作步驟;抗原修復是否達到要求?修復液是否配錯?有沒有加錯抗體(尤其是沒有內對照及外對照的情況下);如果是機器全自動檢測:確認抗體試劑量是否充足?緩沖液配置是否有問題?若單位內部組織處理經常存在問題,則先了解樣本處理環節是否存在問題?
Q:細胞涂片檢測免疫組化怎么修復比較合適?
答:細胞涂片若用酒清固定可以不用抗原修復,若需抗原修復可選用溫和一點的修復方式,如水浴。
Q:OTC膠會不會對組織脫水有影響?
答:OCT包埋劑溶于水,冰凍組織塊應單獨用一個裝有固定液的盆溶解組織上的OCT包埋膠,然后再轉移到無包埋膠的固定液中。
Q:請問如何做每張切片的陰陽對照呢?
答:每種抗體均有特定的表達譜,取該抗體陽性表達的組織做陽性外對照,不表達的組織做陰性對照,將陽性及陰性組織包在同一蠟塊上,只要檢測這種抗體,同一切片上撈上陽陰性對照組織。