達(dá)學(xué)堂·答疑討論
Q:脫水程序完成后,蠟浸泡在脫水機(jī)里,組織在蠟缸里一兩個(gè)小時(shí)會(huì)有影響嗎?
答:沒(méi)有影響,哪怕浸過(guò)夜也沒(méi)有影響。為了使組織對(duì)基因重排沒(méi)有影響,我們 一般周五取材,周五晚上脫水,周六早晨就把組織浸在蠟里面,一直到下周一再 來(lái)包埋,是沒(méi)有問(wèn)題的。
Q:胃腸大標(biāo)本切片時(shí),為什么肌肉層更容易出現(xiàn)空洞?
答:在切的時(shí)候,每一層的硬度是不一樣的,當(dāng)蠟浸得越充分的時(shí)候,切片的時(shí)候黏性大,切片的時(shí)候不太容易出現(xiàn)空洞。空洞怎么來(lái)的?空洞就是在修片的時(shí)候,蠟的黏度性下降,組織整塊掉下來(lái)了,所以容易出現(xiàn)空洞,這個(gè)時(shí)候多細(xì)修一下,空洞很快就沒(méi)有了。
Q:福爾馬林色素如何處理掉?
答:堿性酒精。80%酒精100ml加1%氫氧化鉀1ml,把片子泡在堿性酒精里面,就可以把色素去掉。其實(shí)很少 能看到福爾馬林色素。
Q:夏天的時(shí)候切片容易產(chǎn)生一層水霧是怎么回事?
答:有的時(shí)候潮濕,脫水不是很好的情況下,組織里的水很容易進(jìn)去。
Q:并不是每塊組織都需要脫脂,無(wú)水酒精加二甲苯會(huì)影響脫水效果嗎?
答:不會(huì)的。脫水時(shí)間夠的情況下,二甲苯對(duì)組織沒(méi)有任何影響。
擴(kuò)展
? 二甲苯時(shí)間長(zhǎng)了,組織會(huì)發(fā)硬發(fā)脆,這個(gè)理論是錯(cuò)誤的。
我試過(guò)在二甲苯下面透明過(guò)夜,組織非常好切,根本就不會(huì)出現(xiàn)發(fā)硬發(fā)脆。我也曾經(jīng)試過(guò)二甲苯在 62 度的溫度下過(guò)夜,也沒(méi)有發(fā)現(xiàn)發(fā)硬發(fā)脆。
? 二甲苯是在什么情況下會(huì)造成組織發(fā)硬發(fā)脆 ?
其實(shí)二甲苯只有在浸蠟過(guò)程中才會(huì)造成組織發(fā)硬發(fā)脆,即:組織發(fā)硬發(fā)脆都是在浸蠟過(guò) 程中引起的。原因如下:
(1)二甲苯有一個(gè)特點(diǎn):當(dāng)溫度升高的時(shí)候,它可使水析出。如同南方在潮濕的時(shí)候,染完的片子從酒精里出來(lái),倒了二甲苯馬上發(fā)渾,這個(gè)渾說(shuō)明很多水進(jìn)去了。這時(shí)只需把二甲苯放到溫箱里面半小時(shí),水就沉在了二甲苯的底部,二甲苯就會(huì)變清,高溫會(huì)使二甲苯的水析出來(lái)。
(2)當(dāng)溫度升高的時(shí)候,二甲苯可使水析出,同時(shí)如果組織脫水不徹底,則在浸蠟的過(guò)程中,二甲苯就會(huì)把水析出來(lái)。由于水和蠟不相溶,在水析出來(lái)的過(guò)程中,水把石蠟擋在了組織的外面。而蠟的特點(diǎn)是蠟會(huì)緊緊地把這個(gè)組織包住,組織內(nèi)溫度迅速升高,導(dǎo)致組織里面沒(méi)有蠟的情況下,組織干烤,就會(huì)發(fā)硬。所以組織發(fā)硬就是在脫水不充分的情況下產(chǎn)生的因此,當(dāng)切片不好切時(shí),我們一定要考慮浸蠟的因素,會(huì)不會(huì)蠟里的二甲苯帶過(guò)去太多了。
Q:當(dāng)天下午3點(diǎn)取材,送來(lái)的標(biāo)本也接著取,基本上沒(méi)做大標(biāo)本剖開(kāi)固定,類似情況免疫組化是否可靠?
答:免疫組化固定不好的話,結(jié)果是有問(wèn)題的。我做過(guò)好像有些抗原會(huì)丟失,有些抗原也有增強(qiáng)的現(xiàn)象,似乎對(duì)免疫組化會(huì)有影響,所以還是要固定充分的。
Q:如果選擇環(huán)保固定液,對(duì)后期免疫組化分子會(huì)不會(huì)有影響?
答:環(huán)保固定液用的是用醇性固定液會(huì)有略微影響,但是對(duì)分子不會(huì)有影響。