達(dá)學(xué)堂·答疑討論
Q：檸檬酸高壓修復(fù)溫度和時(shí)間是多少？是高壓鍋檸檬酸燒開(kāi)一直修復(fù)15分鐘嗎？
答：在南京這樣海拔的地方，檸檬酸高壓修復(fù)的溫度達(dá)到100多度是沒(méi)有問(wèn)題的，時(shí)間的話大概控制在15分鐘左右。檸檬酸高壓修復(fù)的時(shí)間總體對(duì)組織形態(tài)的影響較小，所以這個(gè)修復(fù)時(shí)間比堿性修復(fù)的時(shí)間要長(zhǎng)。當(dāng)然15分鐘這個(gè)時(shí)間的前提是組織處理要保證是規(guī)范的，如果組織處理不好的話，這個(gè)修復(fù)時(shí)間可能會(huì)造成一定的涂片。如果是堿性修復(fù)的話，會(huì)對(duì)組織形態(tài)有一定的損壞，要特別注意的是，在自然冷卻的過(guò)程中，堿性修復(fù)仍然會(huì)對(duì)組織有一定的影響，可能會(huì)造成過(guò)度修復(fù)的后果。關(guān)于高壓鍋檸檬酸燒開(kāi)一直修復(fù)15分鐘，我們是燒開(kāi)以后放進(jìn)去，然后維持15分鐘，這個(gè)時(shí)間實(shí)際操作下來(lái)的話對(duì)于檸檬酸來(lái)說(shuō)的話問(wèn)題不是很大，而且修復(fù)的效果也很好，對(duì)組織的破壞很小。
Q：免組化包埋時(shí)強(qiáng)調(diào)溫度對(duì)抗原的影響，抗原修復(fù)時(shí)高溫高壓為什么不會(huì)造成抗原的破壞呢？
答：應(yīng)該是沒(méi)有影響的，但有些單位包埋時(shí)會(huì)用鑷子在酒精燈上燒一下，要注意這時(shí)候鑷子的溫度蠻高的，抗原修復(fù)的時(shí)候可以達(dá)到100度的高溫，無(wú)論是對(duì)形態(tài)也好，抗原也好，都沒(méi)有影響。
Q：做甲狀腺組織冰凍，鏡下總是會(huì)有類似氣泡的東西，已經(jīng)影響醫(yī)生看片了。
答：這種現(xiàn)象比較常見(jiàn)，過(guò)去我們?cè)诤芏嗳豪镉懻撨^(guò)這個(gè)問(wèn)題，沒(méi)有絕對(duì)的消除方法，這種現(xiàn)象存在于膠紙豐富飽滿的的濾泡多一點(diǎn)，中央的空洞在顯微鏡下有立體感，微調(diào)時(shí)似多層中空的小洞，空洞壁比較厚，呈紫黑藍(lán)色，也不像蘇木素著色，應(yīng)該是這種結(jié)構(gòu)的光反射，這種現(xiàn)象，我當(dāng)時(shí)分析是冷凍時(shí)濾泡中央的高濃度/聚集的甲狀腺球蛋白（中性糖蛋白）會(huì)冷凍到脆點(diǎn)以下并局部有高滲非凍水環(huán)境，所以經(jīng)酒精等濕固定后收縮造成膠紙收縮梯度，中央最明顯，高滲非凍水丟失。后來(lái)我染了幾張不同固定液的比較，發(fā)現(xiàn)這種現(xiàn)象在甲醇和丙酮固定中最明顯（但此種固定染色比較艷麗），用95%酒精+5%冰醋酸固定后減少， 片子略晾干后固定效果比較明顯，但染色就不鮮艷，有的膠質(zhì)會(huì)脫失。我的建議是1、甲狀腺組織不要冷凍時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，如果膠質(zhì)脆，復(fù)溫適度；2、可用AF或95%酒精+5%冰醋酸固定，略晾一下再固定；3、入蘇木素前在水里多泡幾十秒；4、濕封切片（不能晾干后再入二甲苯）。你在實(shí)踐中再摸索。
Q：現(xiàn)在腫瘤的浸潤(rùn)深度臨床要求高，取材就比較寬，現(xiàn)在大組織大切片有必要限制在1.5#1.5#0.2
答：其實(shí)“大組織大切片”在根治性標(biāo)本中很常見(jiàn)，原國(guó)家衛(wèi)生部的技術(shù)操作常規(guī)中規(guī)定的標(biāo)本取樣大小基本上都被打破。從臨床病理工作實(shí)際情況來(lái)看，標(biāo)本過(guò)大的影響遠(yuǎn)沒(méi)有過(guò)厚的影響大，2毫米的厚度考慮到的是固定和脫水等試劑的滲透能力與時(shí)效。平常包埋時(shí)，面積過(guò)大的標(biāo)本很難包埋平整，（包埋盒也放置不下）也難以切片完整。因此，最好不要過(guò)大過(guò)厚。
Q：切片機(jī)可以把刀座等零件拆下來(lái)水煮嗎？然后擦干凈再組裝。
答：不建議用水煮的方法清除刀座等配件上的蠟屑和組織碎片。因刀座上有不少位置是需要加注潤(rùn)滑劑的，水煮后容易造成金屬元件表面腐蝕甚至變形。因金屬的熱脹冷縮特性，水煮極易影響刀座的穩(wěn)定性，嚴(yán)格的講，加熱的方法盡量少用，我們最推薦的方法還是每一次使用后的及時(shí)清潔！用軟毛刷清潔！
Q：冰凍組織過(guò)小，像切緣比較薄小的時(shí)候，應(yīng)該怎么加冷凍劑才能比較好切到位？
答：一般是先加注包埋劑做一個(gè)基座，然后在這個(gè)基座上再加包埋劑凍標(biāo)本，并且一定要及時(shí)用冷錘把標(biāo)本壓平整。切片時(shí)注意正確調(diào)整樣本角度，否則無(wú)法切完整。
Q：主流的幾種免疫組化儀都有抗體混勻么？
答：主流的全自動(dòng)免疫組化儀都有試劑混勻技術(shù)的，這是該類設(shè)備必不可少的功能。
