網(wǎng)狀纖維染色的方法及應(yīng)用

                                                                                                                               ——李國平

包括：膠原纖維、網(wǎng)狀纖維、彈性纖維

1、直徑0.2-1um,分支多，交織成網(wǎng)，由III型膠原構(gòu)成，常伴有其它類型的膠原、蛋白多糖和糖蛋白，PAS染色呈紫紅色網(wǎng)狀纖維具有64nm的周期性橫紋，HE染色不著色，具有嗜銀性，經(jīng)銀染法染成黑色，故又稱嗜銀纖維。

2、網(wǎng)狀纖維存在于各種組織中，常見于上皮的基膜，還有平滑肌、脂肪細(xì)胞、毛細(xì)血管和神經(jīng)纖維都有網(wǎng)狀纖維包裹，多分布于造血器官和淋巴網(wǎng)狀器官，如紅骨髓、脾、淋巴結(jié)、

肝、扁桃體和胸腺，消化管和呼吸道管壁的淋巴組織內(nèi)，并成為這些器官的網(wǎng)狀支架。

組織	vG	Masson三色法	MSB	PTAH	PAS	網(wǎng)狀纖維	六胺銀	自體熒光檢測	HE
膠原蛋白	紅色	藍(lán)綠色	藍(lán)色	橘紅	+	灰	—	—	深粉
網(wǎng)狀蛋白	黃色	藍(lán)綠色	藍(lán)色	棕黃	++	黑	—	—	—
彈力蛋白	黃色		藍(lán)色	棕黃	—	—	—	+	粉
肌肉	黃色	紅色	紅色	藍(lán)色	+	灰	灰	—	深粉
基底膜	黃色	藍(lán)綠色	藍(lán)色	橘紅	+++	灰	黑	—	粉
骨	紅色	藍(lán)綠色	藍(lán)色	橘紅	+	灰	—	—	深粉
軟骨	變化	變化	變化	變化	++	變化	變化	—	紫
纖維素	黃色	紅色	紅色	藍(lán)色	+/—	灰	—	—	粉

1、網(wǎng)狀纖維的染色可分為染料染色和金屬浸染。 

2、網(wǎng)狀纖維的染色方法主要使用銀鹽。

1、氨水直接反應(yīng)型：James法，Lillie法，Lillie-Fullmer法。

2、氫氧化鈉/鉀反應(yīng)型：Gomori法，Gordon-Sweet 法，Wilder法，Perdran法，Bielschowsky法。 

3、碳酸鋰/鈉反應(yīng)型：Foot法 ，Hortega法，Hamason-Lushbangh法，DelRio-Hortega法。

類別	James	Foot	Gomori
硝酸銀水溶液	5% 20ml	10% 10ml	10% 8ml
氨水滴定	+
碳酸鋰飽和水溶液		10ml
氫氧化鉀水溶液			10% 2ml
沉淀洗滌		+	+
氨水滴定		+	+
后加硝酸銀水溶液			+
后加氨水			+
去離子水稀釋至	40ml	100ml	100ml
溶液性狀	稍濁	清亮	稍濁

1、脫蠟至水化

2、0.5％高錳酸鉀8-10分鐘

3、2%草酸漂白即可，水洗

4、2％鐵明礬媒染10分鐘，細(xì)水速洗

5、Gomori氏銀氨液1分鐘，晃動，細(xì)水速洗

6、10％福爾馬林還原1分鐘，水洗

7、0.2％氯化金調(diào)色，水洗

8、2%或5％硫代硫酸鈉30秒，水洗

9、核固紅復(fù)染，水洗，脫水，透明，封固

包括：充分氧化、深度漂白、適度媒染、精準(zhǔn)鍍銀、精細(xì)還原、精準(zhǔn)分化

1、充分氧化

①作用：使網(wǎng)狀纖維具有選擇性，增強(qiáng)染色能力，改善背景色調(diào)，減弱對胞核的著染，并有利復(fù)染。

②氧化的試劑： 0.5%高錳酸鉀

高錳酸鉀 0.5g

蒸餾水加至 100ml

③影響氧化的因素：濃度、時(shí)間、試劑有效性

2、深度漂白

①漂白的作用：漂白后使組織無顏色，避免干擾

②漂白的原理：

2MnO4- + 5C2O42- +16H +==2Mn2+ + 10CO2 +8H2O

③試劑：2%草酸

3、適度媒染

①媒染的作用：是加強(qiáng)網(wǎng)狀纖維對銀氨液的選擇性

②媒染的原理：水溶液內(nèi)能夠電離出三價(jià)鐵離子，正電荷，可以和纖維表面的蛋白結(jié)合，在纖維和金屬銀作用過程中，起到媒介作用

③媒染試劑：2%的硫酸鐵銨（俗稱鐵明礬）

④影響因素：溫度，時(shí)間,沖洗的技巧

4、精準(zhǔn)鍍銀

①鍍銀的作用：網(wǎng)狀纖維是由含有糖蛋白的膠原蛋白組成，易與氨性銀結(jié)合，即帶正電荷的二氨合銀離子被具有嗜銀性物質(zhì)的網(wǎng)狀纖維吸附，銀氨液中的銀絡(luò)合物在媒染劑的作用下與組織中蛋白結(jié)合

②鍍銀的原理：AgNO3+KOH→AgOH↓+KNO3

2AgOH → Ag2O↓+H2O

Ag2O+4NH4OH→2[Ag(NH3)2]OH+3H2O

③鍍銀的試劑：托倫試劑

④試劑的配制：染色的關(guān)鍵，關(guān)系成敗

⑤Gomori銀氨液的配制：

10％AgNO34份+10％KOH1份→灰黑色沉淀（記住總量）→加水洗滌反復(fù)3次(湊足總量)→滴加濃氨水→沉淀剛好溶解→加10％硝酸銀→沉淀再次生成→滴入0.5-1滴的濃氨水，觀察沉淀物將溶盡，尚留數(shù)個小顆粒時(shí)停止→加蒸餾水10倍稀釋（托倫試劑）

5、精細(xì)還原

①還原的作用：把與網(wǎng)狀纖維結(jié)合的銀氨配位化合物還原成棕色的金屬銀

②還原的原理：

2[Ag(NH3)2]OH+HCHO →2Ag↓+HCOOH+4NH3+H2O

③還原的試劑 ：4%甲醛 （10%福爾馬林）

④影響因素：中性、酸性、操作技巧

6、精準(zhǔn)分化和定影

①分化的作用及定影:組織經(jīng)銀氨液染色及甲醛還原后，使多余的銀與氯化金反應(yīng)產(chǎn)生氯化銀，然后再用硫代硫酸鈉洗去組織上未還原的銀鹽，從而使組織內(nèi)各成分顯示清晰，已與網(wǎng)狀纖維結(jié)合的銀鹽固定得更加牢固。

②分化使用試劑: 0.2%氯化金

③定影使用試劑：2%硫代硫酸鈉

1、復(fù)染的作用：使對比明顯，減少非特異染色

2、復(fù)染的爭論：要不要復(fù)染，選擇什么方法復(fù)染

3、使用的試劑：核固紅

4、試劑配制：0.1%核固紅：取潔凈燒瓶加蒸餾水100ml、硫酸鋁5g加熱完全溶解后，加核固紅0.1g混合溶解，（加入少許麝香草酚)降室溫，過濾，備用

組織、臟器網(wǎng)狀支架的保留、塌陷或完全破壞，網(wǎng)狀纖維的多少、粗細(xì)、疏密和有無斷裂，對于判斷病變的性質(zhì)、程度及其發(fā)展與轉(zhuǎn)歸具有重要意義。

注：建議配合視頻學(xué)習(xí)，效果更佳。

回放更新時(shí)間：8月8日，回放視頻觀看方式【關(guān)注“達(dá)科為醫(yī)療”公眾號，點(diǎn)擊達(dá)學(xué)堂菜單—課后回放進(jìn)入學(xué)習(xí)】

病理·達(dá)學(xué)堂

2020.07.23